達文西於1503至1507年間一直在創作《蒙娜麗莎》這幅畫作。
有一種說法是，畫作或許是畫中人的丈夫弗朗切斯科·德爾·焦孔多委託達文西而作，以讚頌她的美貌、品德，以及作為富裕絲綢商人妻子的身份。然而，達文西在畫這幅肖像畫時寄託了更宏大的願景：他希望賦予《蒙娜麗莎》生命，使觀者彷彿能在眼前感受到她的存在，甚至能觸及她的思緒。畫作創作結束之後，達文西也未將其交給委託人。此後一直將畫作留在身邊，長達10幾年間不斷修改，甚至直到他過世前都在調整。達文西過世後，畫作一度成為法國皇室收藏，自1797年以來便一直在巴黎羅浮宮展出。
1911年，這幅在法國羅浮宮展出的《蒙娜麗莎》被偷竊，1913年才尋回。今次展廳的第三部分，則以多媒體方式呈現了這一失竊事件。《蒙娜麗莎》曾丟失的經歷，令畫作備受海內外關注，令其影響力進一步傳遞到世界各地，掀起了持續到今日的「蒙娜麗莎熱」。
